La cloroquina 115

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La cloroquina Estoy interesado en el seguimiento de la autofagia en las células epiteliales intestinales de los ratones libres de gérmenes y tengo 2 preguntas diferentes: 1ª. Busco un buen control positivo para la autofagia: es el hambre una buena cosa que hacer es lo mejor para el tratamiento con rapamicina u otro inductor químico bloqueo Tal vez la autofagia con bafilomycin o cloroquina trabajo mejor Cuántos días de tratamiento son suficientes segundo. ¿Tiene alguna recomendación en la que el anticuerpo que debería utilizar para inmunohistoquímica Gracias de antemano. En cuanto a los marcadores, lo mejor es determinar si desea buscar en macroautofagia, Microautophagy (menos frecuente) o Acompañante mediada por la autofagia. Cada uno tiene allí propias marcas. La inhibición se logra mejor mediante ARNip o ARNhc contra las proteínas críticas dentro de las vías para limitar la inhibición de amplio espectro, sino más bien apuntar a vías específicas para evaluar con precisión las consecuencias de la inhibición debajo de las condiciones de ensayo. Soy consciente de que la cloroquina se utiliza en el campo de la autofagia para bloquear la degradación de autofagosomas en los lisosomas. Sin embargo, estoy leyendo revistas recientes que establecen que la inhibición de las funciones lisosómicas con moléculas tales como la cloroquina son conocidos para activar la cascada de la autofagia - podría alguien me punto en la dirección de la literatura que muestra este hecho, cloroquina contiene un átomo de nitrógeno en un secundario amina que podrían ser protonado en el pH ácido del lisosoma netralizing modo la carga que negativamente lípidos que estimula la degradación de lípidos en el lisosoma. Esto a su vez conduce a la inhibición de la degradación enzimática de los lípidos en el lisosoma que conducen a la incidencia de enfermedades neurodegenerativas. Me trataron algunas líneas celulares con cloroquina 25 mM durante 48 horas sin añadir cloroquina fresco. Me preguntaba si el efecto cloroquina se reducirá en el tiempo, porque en ese caso, probablemente tengo que añadir CQ fresco a los medios de comunicación. He encontrado en la literatura que CQ tiene una vida media muy larga cuando se utiliza como medicamento para la malaria. Es lo mismo cuando tratamos las células en un poco de papel que encontré que tratan a las células durante un máximo de 72 horas. Nadie especificar si se añade o no la cloroquina fresco. He encontrado y publicado que la cloroquina induce la apoptosis que puede ser bloqueado por zVAD en células Jurkat K562, así como la autofagia iniciar y CQ hace generar autofagosomas. CQ simplemente no se completa el proceso de autofagia mediante la inhibición de la fusión de los lisosomas con autofagosomas. Así CQ es muy tóxico para las células, hay una versión fluorescente de la CQ hecha por una compañía japonesa si realmente queríamos hacer la salida en función de la carga en las células. Estamos cambiando algunos parámetros para producir lentivirus altos tigre. Así que usamos cloroquina como un agente de transfección en el 25 uM concentración durante 8 horas. Que el cambio de los medios de comunicación. Hasta ahora hemos detectado mucho más alta eficiencia de transfección con cloroquina de transfección CaPO4 convencional a las 24 h. Utilizamos dos condiciones diferentes con 2 FBS y 10 de FBS. En el primer día de SFB 10 parecían proporcionar más eficacia de transfección de 2 FBS. Ambos eran más altos que el método convencional. A las 48 hora hay todavía señales de alta RFP sino que son iniciados para separar las células, tanto en la transfección pero menos de 2 FBS. Nos la cosecha y la recolección de los medios de comunicación 3 veces, a los 48, 72 y 96 horas de la transfección con CaPO4 convencional. Pero parece que no sería eficiente con cloroquina. Hay algunos protocolos que la recogida de los medios de comunicación sólo una vez 2,5 días después de la transfección. No estoy seguro de si las células se mantienen saludables al no cambiar los medios de comunicación durante 2,5 días. Cualquier recomendación será apreciada. Hola Hale, nunca he utilizado la cloroquina pero también se enfrentó al problema de separar las células después de transfección. He realizado transfecciones de HEK293T en OptiMem sin suero, se cambió a medio 6 h después de la transfección y se utiliza un mayor volumen de medio de cultivo (DMEM, FCS, HEPES 10 25 mM, glucosa alta). Va a concentrar sus viriones por ultracentrifugación de todos modos. La voluntad volumen más alto reduce el estrés celular que puede ocurrir durante los períodos de cultivo prolongados sin cambio de medio. Basta con pensar en un aumento de los desechos metabólicos o un estrés osmótico debido a la evaporación. Además restante reactivos de transfección que podrían tener efectos tóxicos se vuelven más diluido. He utilizado una densidad celular de aprox. 6x106 células HEK293T por placa de 100 mm (superficie delta Nunclon) y 18 ml de medio de cultivo mencionado superior. La recolección después de 60-72 h dio mejores resultados. A partir de las décadas de 1940 y 1990, la cloroquina es la base del tratamiento de la malaria en todo el mundo. Selección de cepas de P. falciparum resistentes se informó por primera vez en el sudeste de Asia (la frontera entre Tailandia y Camboya) y América del Sur (Colombia) en la década de 1950. Desde entonces resistencia a la cloroquina se ha extendido mucho más allá del primer foco y ahora se encuentra en todas las partes del mundo donde la malaria es endémica. resistencia a la cloroquina ha surgido de forma independiente a menos de diez veces en los últimos 50 años. La cloroquina puede ser usado en el tratamiento contra la malaria en el estado presente tanto en los niños y las poblaciones de adultos resistencia a la cloroquina se presenta principalmente en P. falciparum (Pf). pero por P. vivax (PV) responde a la cloroquina. La siguiente política ha sido adoptada en la India - 1) Sin complicaciones de la malaria por P. vivax. La cloroquina es el medicamento de elección el otro 50 se debe a Pf. En India. el dramático aumento de Pf es debido a la resistencia a la cloroquina. pero la disminución de Pv se debe también a la cloroquina. Hay algunos informes de resistencia a la cloroquina en N. E. India . El principal problema es la falta de disponibilidad de pruebas de diagnóstico en las zonas rurales. Diagnóstico por frotis de sangre periférica es el estándar de oro. pero requiere de técnicos cualificados para hacer la prueba. Las pruebas rápidas para PV / Pf se han hecho disponibles. pero las pruebas de diagnóstico de sensibilidad no están disponibles. el fármaco de elección es la cloroquina. Si las pruebas rápidas son positivos para Pf. a continuación, se debe utilizar ACT. Esta política es evitar el uso indiscriminado de la ACT. ya que esto puede conducir a la resistencia a los medicamentos. Por lo tanto. La cloroquina sigue desempeñando un papel importante en la gestión de Pv.